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Il candidato confronti i metodi chimici ed enzima-
tici per il dosaggio degli analiti
Punti chiave
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Metodi chimici di dosaggio
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Vantaggi e svantaggi dei metodi chimici
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Metodi enzimatici di dosaggio
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Vantaggi dei metodi enzimatici
Svolgimento
Il dosaggio degli analiti può essere effettuato con metodi chimici ed enzima-
tici. Nei metodi chimici un reagente interagisce con l’analita (in condizioni di
reazione controllate per temperatura, tempo, pH) e forma un addotto colora-
to. Una soluzione a concentrazione nota dell’analita (lo standard) trattata con
lo stesso protocollo consente la costruzione della taratura del metodo, dalla
quale si ricava la concentrazione incognita dell’analita nel campione. I van-
taggi del metodo chimico sono la semplicità di realizzazione e l’esiguo costo.
I maggiori svantaggi sono la bassa sensibilità e specificità, nonché una certa
tossicità di alcuni metodi chimici. Il dosaggio di proteinemia e proteinuria
viene eseguito impiegando un reattivo che reagisce con le molecole proteiche
e sviluppa un colore la cui intensità, entro un certo intervallo, è proporzionale
alla concentrazione proteica. Molto utilizzato è il reagente del biureto, che
reagisce con i legami peptidici delle proteine sviluppando un colore rosso. I
corpi chetonici sono dosati con metodo chimico. Si utilizzano delle strisce che
contengono nitroprussiato di sodio e fosfato bisodico a pH 9.
Nel metodo enzimatico, un enzima commerciale riconosce l’analita da dosa-
re come suo substrato e ne catalizza la trasformazione in prodotto. Il dosag-
gio dell’attività dell’enzima diventa misura della concentrazione dell’analita,
sfruttando una retta di taratura costruita con concentrazioni note dell’analita
in esame. In alcuni casi, il prodotto della reazione catalizzata dal primo en-
zima commerciale diventa il substrato di un altro enzima commerciale, il cui
dosaggio è basato sulla formazione/scomparsa di un cromoforo e risulta per
questo più facilmente quantificabile rispetto al primo enzima. Le deidrogenasi
offrono un semplice dosaggio spettrofotometrico in virtù della loro necessità