Biologia Molecolare

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SEQUENZIAMENTO E ANNOTAZIONE DEI GENOMI Paragrafo 4.2 [ 87]
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Libreria di frammenti di DNA
Adattatori
Ligazione agli adattatori
Adattatori catturati
sulla super%cie interna
della cella di &usso
Formazione del ponte
Ampli%cazione isotermica
del ponte e generazione
di cluster
Denaturazione e
rilascio %lamenti
inversi
Sequenziamento per sintesi con terminatori reversibili
a)
b)
c) d)
e) f)
g)
FIGURA 4.4 W Fasi della tecnologia ILLUMINA di sequen-
ziamento massivo del DNA. Le fasi illustrate nella figura
sono: a) il DNA è frammentato in pezzi di 200-600 basi;
b) corti oligonucleotidi, chiamati adapters, sono legati ai
frammenti di DNA; c) il DNA è denaturato e i frammenti
di DNA a singola catena sono posti su una superficie dove
sono presenti dei primer complementari agli adapters, che
quindi si appaiano tra loro; d) il DNA viene fatto replicare
per formare dei cluster di frammenti unici sulla superficie;
e) le doppie eliche sono quindi denaturate per formare clu-
sters di filamenti singoli di DNA; f) primer specifici vengono
quindi aggiunti che si appaiano ai framenti singoli di DNA
e il sequenziamento avviene per sintesi del DNA con l’uso di
nucleotidi fluorescenti (illustrato nella parte in basso della
figura); g) la sequenza viene rilevata automaticamente da
un computer collegato a un fotorilevatore.